Das neue NEBExpress MBP Fusion and Purification System nutzt den für Proteinexpression in E. coli optimierten Ptac Promoter in Kombination mit der Sequenz des Maltose-Binding-Protein (MBP).
Das resultierende MBP-Fusionsprotein kann in großen Mengen im Cytoplasma von E. coli exprimiert werden. Das MBP-Tag dient dabei zum einen der einfachen Aufreinigung über ein Amylose Säule, erhöht aber auch die Löslichkeit des Proteins in der Zelle. So entstehen deutlich weniger Probleme mit unlöslichen Produkten, wie z.B. “inclusion bodies”.
NEBExpress MBP System - Workflow
Der im NEBExpress MBP Fusion and Purification System enthaltene Vektor pMAL-c6T codiert für ein His-getaggtes MBP gefolgt von einer Multiple Cloning Site. Diese enthält die Sequenz für eine TEV Protease Schnittstelle sowie Stop-Codons für alle 3 möglichen Reading Frames.
Nach Expression des MBP-Fusionsproteins in E. coli erfolgt die erste Aufreinigung mit Hilfe einer Amylose-Matrix, an welche das MBP reversibel bindet. Kleinere Proteinmengen können direkt aus 200 – 500 µl Zellkulturüberstand isoliert werden. Werden große Proteinmengen benötigt, so können diese durch die Lyse der Zellen aus bis zu einem Liter Bakterienkultur gewonnen werden.
Das isolierte Protein wird durch Zugabe von Maltose schonend von der Säule eluiert. Anschließend kann mittels TEV Protease Verdau das MBP Affinitäts-Tag vom Zielprotein abgespalten werden. Die mitgelieferte TEV Protease trägt, wie das MBP auch, ein His-Tag. Eine abschließende Aufreinigung über eine Nickel-Matrix entfernt die TEV Protease und das MBP und Sie erhalten ein hochreines, Tag-freies Zielprotein.
- Hohe Expressionsausbeuten von bis zu 100 mg / Liter Bakterienkultur
- Erhöhte Löslichkeit des exprimierten Proteins durch Fusion mit MBP
- Hochreines und Tag-freies Protein durch Two-Step Aufreinigung
- Schonende Elution ohne Detergentien / Denaturierung
Das NEBExpress MBP Fusion and Purification System enthält alle notwendigen Reagenzien für den Standard-Workflow:
- pMAL-c6T Vector
- Amylose Resin
- TEV Protease (inkl. Reaktionspuffer)
- Antikörper und Kontrollprotein für Western Blot Analyse
- E. coli NEB Express
| PRODUKT | Art.Nr.: | GRÖSSE | INFO | |
|---|---|---|---|---|
| NEBExpress MBP Fusion and Purification System | E8201S | 1 Kit |  |
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Stand 01.01.2024
Zusätzlich erhältlich:
| PRODUKT | Art.Nr.: | GRÖSSE | INFO | |
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| Amylose Magnetic Beads | E8035S | 25 mg | |
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| Amylose Resin | E8021S | 15 ml | |
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| Amylose Resin | E8021L | 100 ml | |
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| Amylose Resin High Flow | E8022S | 15 ml | |
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| Amylose Resin High Flow | E8022L | 100 ml | |
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| NEBExpress Ni-NTA Magnetic Beads | S1423S | 1,0 ml | |
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| NEBExpress Ni-NTA Magnetic Beads | S1423L | 5,0 ml | |
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| NEBExpress Ni Spin Columns | S1427S | 10 columns | |
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| NEBExpress Ni Spin Columns | S1427L | 25 columns | |
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| NEBExpress Ni Resin | S1428S | 25 ml | |
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| TEV Protease | P8112S | 1.000 units | |
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| pMAL c6T Vector | N0378S | 10 µg | |
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Stand 01.01.2024
Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.
