Exonukleasen und Endonukleasen spielen in vielen modernen molekularbiologischen Anwendungen eine tragende Rolle
Wussten Sie, dass New England Biolabs eine große Auswahl dieser wichtigen molekularbiologischen Werkzeuge anbietet?
In den Forschungs- und Entwicklungsabteilungen von NEB arbeitet ein eigenes Expertenteam daran, die Funktion dieser Enzyme besser zu verstehen und deren Anwendung zu optimieren.
Bei uns finden Sie auch eine Reihe hilfreicher Tools und umfangreiche Informationen die Ihnen helfen, die richtige Nuklease für Ihre Anwendung zu finden.
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Feature Article – The effect of nucleic acid modifications on digestion by DNA exonucleases
Prominente Beispiele:
Thermolabile USER II Enzyme
Die Thermolabile USER II Enzyme erzeugt eine Nukleotidlücke an der Stelle eines Uracilrests. Da USER II bei Temperaturen >65°C zu 100% inaktiviert werden kann, erleichtert es diverse Arbeitsabläufe und ermöglicht den direkten Einsatz von DNA in nachgelagerten Anwendungen.
T7 Endonuclease I
Die T7 Endonuclease I erkennt und spaltet DNA-Fehlpaarungen, kruziforme DNA-Strukturen, Holliday-Strukturen, heteroduplex DNA und genickte doppelsträngige DNA. Das Enzym schneidet dann an der ersten, zweiten oder dritten Phosphodiesterbindung, die 5´ zum Mismatch gelegen ist.
Thermostable FEN1
Die thermostabile Flap Endonuclease 1, FEN1, katalysiert die Spaltung von 5´ DNA-Überhängen aus verzweigten, doppelsträngigen DNA-Substraten und bildet einen 5´ Phosphatterminus. FEN1-Produkte können durch DNA-Ligase ligiert werden, um doppelsträngige DNA zu erzeugen. In vivo ist FEN1 ein wesentlicher Bestandteil der Okazaki-Fragment-Reifung und spielt auch bei der Reparatur von Basenexzisionen eine Rolle.
Lambda Exonuklease
Die Lambda Exonuklease baut lineare oder genickte doppelsträngige DNA in der Richtung 5´ ->3´ ab und ist dabei sehr prozessiv. Das bevorzugte Substrat ist 5´-phosphorylierte doppelsträngige DNA, nichtphosphorylierte Substrate werden dagegen mit stark reduzierter Geschwindigkeit abgebaut. Empfohlen wird die Lambda Exonuklease für die Konversion von linearer doppelsträngiger DNA in einzelsträngige DNA.
Thermolabile Exonuclease I
Die Thermolabile Exonuclease I degradiert lineare einzelsträngige DNA in 3´ -> 5´ Richtung. Im Gegensatz zur Exonuclease I (NEB #M0293) kann die Thermolabile Exonuclease I bei 80°C in einer Minute hitzeinaktiviert werden.
Exonuclease V (RecBCD)
Die Exonuclease V (RecBCD) ist eine DNA-spezifische Exonuklease, die auf einzelsträngiger DNA auch als Endonuklease wirkt. Das Enzym bindet sowohl an 5’ als auch an 3’ Enden linearer doppelsträngiger DNA und spaltet diese in 3’ -> 5’ und auch in 5’ -> 3’ Richtung. Exonuclease V (RecBCD) erfordert ATP in der Reaktion.
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