EnGen Mutation Detection Kit

Überprüfung der Genome Targeting Effizienz mit dem EnGen Mutation Detection Kit

Der T7 Endonuclease Assay ist eine verbreitete Methode zur Bestimmung der Genome Targeting Effizienz.

Mit dem EnGen Mutation Detection bieten wir eine optimierte und einfach zu handhabende Alternative zum Homebrew T7 Endonuclease Assay an.

Das EnGen Mutation Detection Kit enthält alle notwendigen Reagenzien, um den Erfolg Ihres Genome Editings zu quantifizieren. Zuerst amplifizieren Sie den editierten DNA-Bereich durch „ultra-fidelity PCR“ mit dem im Kit enthaltenen Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix. Die Amplifikate werden dann Hitze-denaturiert und langsam abgekühlt, sodass mutierte und Wildtyp-Einzelstränge Heteroduplexe ausbilden. Im anschließenden Verdau mit der strukturspezifischen EnGen T7 Endonuclease I werden dabei ausschliesslich Heteroduplexe geschnitten. Der Anteil geschnittener DNA ist somit proportional zur Effizienz des Genome Editings und ein einfacher und schneller Indikator.

EnGen Mutation Detection T7 Endonuclease Assay Method

Genomische DNA wird mit Primern amplifiziert, die den modifizierten Locus flankieren. Die PCR-Produkte werden dann denaturiert und wieder annealed, was zu 3 möglichen Strukturen führt. Duplexe mit einer Fehlpaarung von mehr als einer Base werden durch T7 Endonuclease I verdaut. Die DNA wird anschließend elektrophoretisch getrennt, die Fragmentanalyse ermöglicht die Abschätzung der Targeting-Effizienz.

Das EnGen Mutation Detection Kit stellt eine auf kurze Arbeits- und Reaktionszeiten optimierte Version des T7 Endonuclease Assay dar: Nach der PCR können Sie ohne Reinigungsschritt mit der Denaturierung fortfahren und der direkt anschließende Verdau ist bereits nach 15 Minuten vollständig.

Schließlich komplettieren wir das Kit für Sie mit einem DNA-Template und Primern für eine parallele Kontroll-Reaktion.