Herstellung von Homologous Repair Templates

Modifikationen an den Cas9-target Sequenzen kann man auch erreichen, indem man ein sog. “homologous directed repair”  (HDR) Template zum Transfektionsansatz mit sgRNA und Cas9 hinzufügt. Diese HDR Templates sind Plasmide mit 2-3 kb-langen Sequenzen rund um die gewünschte Targetsequenz. So können über die homologen Regionen die gewünschte Mutation, Deletion oder “knock-ins” von Resistenz- oder Reportergenen eingebracht werden.

Die Target Region kann per High-Fidelity PCR an gDNA amplifiziert und dann zur weiteren Bearbeitung in ein Plasmid kloniert werden. Wir empfehlen Ihnen dafür die Q5 High Fidelity DNA Polymerase gefolgt vom PCR Cloning Kit. Zur Bearbeitung und Modifikation der Sequenz empfehlen wir dann NEBuilder HiFi DNA Assembly oder gerichtete Mutagenese mit dem Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit.

Produkttabelle

PRODUKT	Art. #	GRÖSSE	INFO
Q5® High-Fidelity DNA Polymerase	M0491S	100 units
	M0491L	500 units
Q5® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase	M0493S	100 units
	M0493L	500 units
NEB PCR Cloning Kit	E1202S	20 rxns
NEB PCR Cloning Kit (Without Competent Cells)	E1203S	20 rxns
Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit	E0554S	10 rxns
Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit (Without Competent Cells)	E0552S	10 rxns
NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix	E2621S	10 rxns
	E2621L	50 rxns
	E2621X	250 rxns
NEBuilder® HiFi DNA Assembly Cloning Kit	E5520S	10 rxns

Stand: 01.01.2024