Monarch Kits für RNA Aufreinigung und Konzentration
Monarch RNA Cleanup Kits bieten Ihnen eine schnelle und einfache Silica-Säulchen-basierte Lösung zur RNA Purification nach enzymatischen Reaktionen (z.B. in vitro Transkription, DNase I Behandlung, Capping, Labeling etc.) oder diversen RNA-Präparationsmethoden wie z.B. Phenol/Chloroform und Trizol.
Video: RNA Purification Protocol
Wir bieten Monarch RNA Cleanup Kits in drei verschiedenen Säulchen-Designs für unterschiedliche Bindekapazitäten an:
- für 10 μg (NEB #T2030)
- für 50 μg (NEB #T2040)
- und für 500 μg (NEB #T2050).
Die Säulchen in allen Kits sind dabei optimiert für eine Elution in geringen Volumina sowie zur Reduktion ungewollter Pufferverschleppungseffekte, die zu Puffer- oder Salzkontaminationen im finalen RNA-Eluat führen können. Mit Hilfe unserer RNA Purification Kits erhalten Sie hochqualitative, kontaminations-freie und konzentrierte RNA für Ihre nachfolgenden Anwendungen.
Dabei haben Sie die Wahl: mit dem empfohlenen Monarch-Standard-Protokoll reinigen Sie alle RNAs ≥ 25 nt auf – aber mit nur wenigen Änderungen im Protokoll können Sie bei Bedarf auch miRNAs und andere kleine RNA Moleküle ab 15 nt aufreinigen und konzentrieren.
Warum Sie Monarch RNA Cleanup Kits nutzen sollten:
- Sie entfernen in nur 5-15 min Puffer, Enzyme und kontaminierende NTPs aus enzymatischen Lösungen oder RNA-Präparationen
- Sie erhalten eine exzellente RNA-Rückgewinnung bei höchster RNA Qualität für nachfolgende Anwendungen
- Sie wählen dabei bedarfsgerecht eines der drei RNA Purification Kits mit der gewünschten Bindekapazität und dem optimalen Elutionsvolumen
Video: RNA Cleanup Tipps
Typische Anwendungen für RNA Cleanup Kits
| RNA-Aufreinigung und Aufkonzentration aus konventionellen Präparationsmethoden (z.B. Phenol/Chloroform oder Trizol/ wässrige Phase) | Gewonnene RNA wird weiter aufgereinigt und aufkonzentriert |
| RNA Aufreinigung / Rückgewinnung aus enzymatischen Reaktionen | Das Kit entfernt zuverlässig Enzyme (inkl. RNA Polymerasen, DNase I, Proteinase K und Phosphatasen) sowie Reaktionspuffer/Salze |
| In vitro Transkription Cleanup | IVT Enzymes sowie überschüssige NTPs werden rückstandsfreie entfernt für eine hochqualitative neu-synthetisierte RNA |
| RNA Gel Extraction | Aufreinigung von RNA aus Agarose Gelen |
| RNA Fraktionierung | Fraktionierung von RNAs in Pools aus kleinen und großen RNA Molekülen |
Kundenbewertungen
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„Sample Type: Yeast (fresh mycelium) (compared to: Qiagen RNeasy Mini Kit) “Better yield and quality; easy protocol and good and consistent results among samples.”“ Gisele, Research Associate, Mississippi State University |
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„Sample Type: Gram Positive Bacteria (compared to: Qiagen RNeasy Mini) “I've been using the RNeasy kit for some time, but I've been unable to have much luck. It seems geared toward eukaryotes and I've been working with Gram Positive prokaryotes… I tried the NEB `{`Total`}` RNA Miniprep Kit and it was much more straightforward. I also got excellent results the first time I used it.”“ Kyle, Postdoctoral Researcher, University of CA, Berkeley |
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„Sample Type: CD34 Cells “I repeated the RNA extraction using `{`NEB’s Monarch Total RNA Miniprep Kit`}`. The quality of RNAs were checked using Tape Station. And all four samples had RIN between 8.3 to 9.3, so they are all good…Your RNA extraction kit is easy to use and saves time.”“ Researcher, UCL Great Ormond Street Institute of Child Health |
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„Sample Type: Oat Protoplast Cells (compared to Qiagen RNeasy Plant Mini Kit) “I compared the yield of RNA extracted and the purity of the RNA based on spectrometer (Nanodrop). When I compared to my usual RNeasy kit from Qiagen to the Monarch sample, I obtain 5 times more RNA from my sample as well as higher purity of my sample with the Monarch RNA mini-prep.”“ Researcher, Iowa State University |
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„Sample Type: Mouse Heart (compared to: Thermo Fisher Scientific GeneJet RNA Isolation Kit) ``I liked the consistency, ease of use, and the fact that everything you need (e.g. DNase, Proteinase K) comes in the kit. Both the concentration and quality of the isolated RNA from the Monarch Kit were slightly better than the GeneJet kit. The bigger difference was in the consistency of the RNA isolations between samples--it was much better with the Monarch Kit.``“ Natalie, PhD. Student, Winnipeg, CA |
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„Sample Type: RNA from Virus in cell culture supernatant (compared to: TRIzol extraction) “I’ve had a go extracting RNA from a couple of different samples using the Monarch kit, in parallel with Trizol extractions from duplicate samples. The initial results, nanodrop analysis of the extracted RNA, were very positive.”“ Jessica Purcell, Pirbright Institute, United Kingdom |
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Nutzen Sie bedarfsgerecht die Flexibilität der Monarch Kits in Bindekapazität und Elutionsvolumen
| Monarch RNA Cleanup Kit | NEB #T2030 (10 µg) | NEB #T2040 (50 µg) | NEB #T2050 (500 µg) |
|---|---|---|---|
| Bindekapazität: | 10 μg | 50 µg | 500 µg |
| RNA Größenbereich: | ≥ 25 nt ( ≥ 15 nt bei Einsatz des modifizierten Protokolls) | ||
| Typische Rückgewinnung: | 70–100% | ||
| Elutionsvolumen: | 6–20 µl | 20–50 µl | 50–100 µl |
| Reinheit: | A260/280 > 1.8 und A260/230 > 1.8 | ||
| Bearbeitungsdauer: | 5 Minuten Zentrifugations- und Inkubationszeit | 10–15 Minuten Zentrifugations- und Inkubationszeit | |
| Typische nachgeschaltete Anwendungen: | RT-PCR, RNA library prep für NGS, Small RNA library prep für NGS, RNA labeling | RT-PCR, RNA library prep für NGS, Herstellung von RNP Komplexen für CRSIPR/Cas Genome Editing, Mikroinjektion, RNA labeling, RNA Transfektion | RT-PCR, RNA library prep für NGS, RNA labeling, RNAi, Mikroinjektion, RNA Transfektion |
RNA Purification aus IVT Reaktionen
rRNA (10, 50 bzw. 500 µg von16S und 23S Ribosomal Standards aus E. coli, Sigma) wurde mit einem Monarch RNA Cleanup Kit (10 µg, NEB #T2030) (50 µg, NEB #T2040) (500 µg, NEB #T2050) aufgereinigt und in Nuclease-freiem Wasser eluiert. Die Rückgewinnung der RNA in Prozent wurde berechnet aus den A260 Werten (Trinean DropSense 16). Eine Rückgewinnung von jeweils ~80% der RNA ist bereits erreicht mit nur 6 µl Elutionsvolumen beim Monarch RNA Cleanup Kit (10 µg, NEB #T2030), mit 20 µl beim Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg, NEB #T2040), und mit 50 µl beim Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg, NEB #T2050).
Das Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg) ist optimal für die Aufreinigung von großen RNA-Mengen (>250 µg) aus in vitro Transkriptionen (IVT)
A) RNA Transkripte unterschiedlicher Größen (0.6-8 kb) wurden hergestellt mit dem HiScribe™ T7 Quick High Yield RNA Synthesis Kit (NEB #E2050; Einsatz von 1.5-1.8 µg Template DNA in 2 Stunden bei 37°C.) Je 40 µl einer IVT Reaktion wurden mit dem Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg, T2050) aufgereinigt und in 200 µl eluiert. Die RNA Erträge wurden aus den A260, Werten eines Nanodrop® spectrophotometer errechnet und lagen im Bereich von 268-425 µg RNA pro IVT Reaktion.
B) RNA Integrität wurde mit einem 1% Agarose-TBE Gel (SYBR® Gold-Färbung, 200 ng RNA/Spur) überprüft.
Mit den Monarch RNA Cleanup Kits entfernen Sie hocheffektiv nicht-eingebaute, kontaminierende Nucleotide.
Es wurden je 6 verschieden sgRNA Synthesereaktionen mit dem EnGen® sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes (NEB #E3322) mit dem Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg, NEB #T2040) bzw. mit dem Produkt eines Mitbewerbers (nach Herstellerempfehlungen) aufgereinigt und in 50 µl Nuklease-freiem Wasser elutiert. Die sgRNA Erträge würden aus den A260, Werten errechnet (Trinean Dropsense™ 16). Die Erträge des Monarch Cleanup Kit sind vergleichbar mit den Erträgen anderer kommerziell verfügbarer Kits.
Nach der Aufreinigung jedoch wurden Restmenge von kontaminierenden Nukleotiden (NTPs) mittels LC-MS bestimmt (Prozentbereich NTPs (rATP+rCTP+rGTP+rUTP)/Prozentbereich sgRNA). Das Monarch RNA Cleanup Kit entfernt in jedem Fall deutlich mehr NTPs und ist allen anderen Kits deutlich in Performance überlegen.
Verfügbare Monarch RNA Aufreinigungs-Kits:
| PRODUKT | Art. # | GRÖSSE | INFO | |
|---|---|---|---|---|
| Monarch RNA Cleanup Kit (10 µg) | T2030S | 10 preps |  |
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| T2030L | 100 preps | |||
| Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg) | T2040S | 10 preps | |
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| T2040L | 100 preps | |||
| Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg) | T2050S | 10 preps | |
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| T2050L | 100 preps | |||
Stand: 01.01.2024
Außerdem erhältlich:
| PRODUKT | Art.Nr.: | GRÖSSE | INFO | |
|---|---|---|---|---|
| Monarch RNA Cleanup Columns (10 µg) | T2037L | 100 preps | |
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| Monarch Buffer BX | T2041L | 80 ml | |
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| Monarch Buffer WX | T2042L | 40 ml | |
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| Monarch RNA Cleanup Columns (50 µg) | T2047L | 100 preps | |
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| Monarch RNA Cleanup Columns (500 µg) | T2057L | 100 preps | |
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Stand: 07.05.2024
Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.
