Monarch Total RNA Miniprep Kit

Tipps für erfolgreiche RNA-Aufreinigungen

So gelingen Ihre RNA-Aufreinigungen:

Inaktivieren Sie RNasen möglichst direkt bei der Probenvorbereitung:
Nukleasen sind quasi in jedem Probenmaterial vorhanden und werden RNA unspezifisch abdauen. Eine Inaktivierung der RNAsen in Ihrer Probe ist daher essenziell. Nutzen Sie stets RNase Inhibitoren und prozessieren Sie Ihre Proben möglichst zügig. Sorgen Sie stets für ein Nuklease-freies Laborumfeld.

Nehmen Sie nicht mehr Probenmaterial als vorgesehen:
Unsere Protokolle und Puffermengen sind eingestellt für eine optimale Menge an Probenmaterial. Zuviel Probenmaterial verringert die Ausbeute und Reinheit durch unvollständige Zelllyse oder Verklumpungen in der Säule.

Stellen Sie sicher, dass Ihre Proben vollständig lysiert/homogenisiert sind:
Nur vollständig aufgeschlossenes Probenmaterial ermöglicht optimale Erträge.

Entfernen Sie kontaminierende gDNA Reste aus Ihren RNA-Aufreinigungen:
Verbleibende gDNA aus Ihrem Probematerial wird durch die mitgelieferten gDNA Removal Columns und einen nachfolgenden DNase I Verdau direkt auf der Säule entfernt. Optional können Sie den DNase I Verdau nach RNA Elution von der Säule durchführen.

Workflow (klicken Sie das Bild zum Vergrößern)

Monarch_Total-RNA_Workflow

Auswahl von Input-Mengen von Probenmaterial bei Verwendung des Monarch Total RNA Miniprep Kits

RNA-Ausbeute, -Reinheit und -Integrität variieren immens abhängig von Probentyp, Einsatzmenge und Probenzustand. Im Folgenden haben wir einige empirische Daten zu Ausbeute, Reinheit und RIN aus einer Vielzahl von Probentypen sowie Hinweise zu den maximalen Einsatzmengen für jede dieser Proben bereitgestellt. Es ist sehr wichtig, die Säule nicht zu überlasten, wenn RNA extrahiert und gereinigt wird, da Ertrag, Reinheit und Integrität leiden können.

Probentyp Input Erträge
(μg)		 RIN Maximale Ausgangsmenge
Zellen / Zellkultur
HeLa 1×106 Zellen 12–15 9–10 1 x 107 Zellen
HEK 293 1×106 Zellen 12–14 9–10 1 x 107 Zellen
NIH 3T3 1×106 Zellen 8–12 9–10 1 x 107 Zellen
Vollblutproben
Human Frisch 200 μl 0.5–1.0 7–8 3 ml
Gefroren 200 μl 0.5–1.0 7–8 3 ml
Stabilisiertes Gewebe 200 μl 0.5–1.0 7–8 3 ml
Ratte Gefroren 100 μl 5.6 9 1 ml
Isolierte Blutzellen
PBMC (isoliert von 5 ml Vollblut) 5 ml 3 7 1×107 Zellen
Gewebe
Ratte Leber Gefroren, pulverisiert 10 mg 25 8–9 20 mg
Stabilisiertes Gewebe 10 mg 50–60 8–9 20 mg
Ratte Milz (Stabilisiertes Gewebe, homogenisiert) 10 mg 40–50 9 20 mg
Ratte Niere (Gefroren, pulverisiert) 10 mg 7–10 9 50 mg
Ratte Hirn Gefroren, pulverisiert 10 mg 2–3 8–9 50 mg
Stabilisiertes Gewebe 10 mg 0.5–1.5 8–9 50 mg
Stabilisiertes Gewebe, homogenisiert 10 mg 5–8 8–9 50 mg
Ratte Muskel (Gefroren, pulverisiert) 10 mg 2–3 8–9 50 mg
Maus Muskel Gefroren, pulverisiert 10 mg 3 8–9 50 mg
Gefroren, pulverisiert, homogenisiert 10 mg 5 7–8 50 mg
Stabilisiertes Gewebe, homogenisiert 10 mg 8–10 9 50 mg
Maus Herz (Stabilisiertes Gewebe, homogenisiert) 10 mg 5–6 8–9 50 mg
Hefe
S. cerevisiae Gefroren, homogenisiert 1×107 Zellen 50 9–10** 5×107 Zellen
Frisch, Zymolyase®-verdaut 1×107 Zellen 60 9** 5×107 Zellen
Bakterien
E. coli Frozen 1×109 Zellen 5 10 1×109 Zellen
Gefroren, homogenisiert 1×109 Zellen 10 10 1×109 Zellen
Gefroren, Lysozym-verdaut 1×109 Zellen 70 10 1×109 Zellen
B. cereus Gefroren, Lysozym-verdaut 1×108 Zellen 20–30 9 1×109 Zellen
Gefroren, homogenisiert 1×108 Zellen 8 9–10 1×109 Zellen
Pflanzen
Maisblatt (Gefroren, pulverisiert, homogenisiert) 100 mg 45 8 100 mg
Tomatenblatt (Gefroren, pulverisiert, homogenisiert) 100 mg 30 8 100 mg

S. cerevisiae total RNA was run on an Agilent® Nano 6000 Chip using plant assay.

Zymolyase® is a registered trademark of Kirin Brewery Co Ltd.

Agilent® is a registered trademark of Agilent Technologies

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