Die richtige DNA Polymerase für Ihre Anwendung
Die Polymerasekettenreaktion (PCR) ist die am häufigsten verwendete Methode zur DNA-Vervielfältigung. New England Biolabs bietet eine große Auswahl von DNA Polymerasen für unterschiedliche Anwendungsgebiete dieser Methode an. So hat NEB der Forschergemeinde die erste, kommerziell erhältliche Taq DNA Polymerase verfügbar gemacht. Auch die Entdeckung einer thermostabilen, „high-fidelity“ DNA Polymerase geht auf das Konto von NEB-Wissenschaftlern.
OneTaq DNA Polymerase & Q5 DNA Polymerase
Die neuesten Errungenschaften auf diesem Gebiet sind die OneTaq® DNA Polymerase, eine sehr robuste Polymerase für Standard-Anwendungen, und die Q5® High-Fidelity DNA Polymerase, welche sich durch herausragende Genauigkeit (~280-fach genauer im Vergleich zu Taq DNA Polymerase) auszeichnet. Bei der Entwicklung beider DNA Polymerasen wurde auch insbesondere die Anwendungsfreundlichkeit bedacht. So können beide leicht an verschiedene Targets, z.B. mit extremen GC/AT-Verhältnissen, angepasst werden.
Luna qPCR Produkte
New England Biolabs hat für Sie die neuen Luna Universal qPCR Produkte für zuverlässige Performance auf diversen Proben und Zielsequenzen entwickelt. Wir nutzen dabei die neueste Enzymtechnologie – ganz auf Höhe der Zeit. Sie finden kinderleicht das richtige Reagenz für Ihre Experimente: verfügbar für Farbstoff- wie für Sonden-basierte Detektion sind Luna Universal qPCR & RT-qPCR Produkte kompatibel mit allen gängigen Plattformen.
Nutzen Sie unsere kosteneffizienten Luna Produkte und erhalten Sie die Sensitivität, Spezifität und Zuverlässigkeit, die Sie vom aktuellsten und klassenbesten Reagenz erwarten dürfen.
Isothermale Amplifikation
Für bestimmte Anwendungen, z.B. in der Patienten-nahen Labordiagnostik oder im mobilen Einsatz vor Ort, ist die PCR manchmal jedoch nicht die beste Methode. Hier bieten sich isothermale Amplifikations-Methoden an, da diese ohne die für die PCR notwendigen Apparaturen auskommen.
Hier macht man sich typischerweise eine Eigenschaft bestimmter DNA Polymerasen zu Nutze, die sogenannte Strand Displacement-Aktivität. Dabei verdrängt die DNA Polymerase, typischerweise Bst DNA Polymerase, Large Fragment während der DNA-Synthese den DNA-Gegenstrang der Matrizen-DNA, so dass eine Denaturierung der DNA wie bei der PCR nicht notwendig ist.
Auch für diese Methoden entwickelt NEB die Werkzeuge ständig weiter und hat kürzlich die Serie der in-silico-entworfenen und funktionsoptimierten Bst 3.0 , 2.0 und Bst 2.0 WarmStart® DNA Polymerasen veröffentlicht, welche sich unter anderem durch höhere Zuverlässigkeit sowie Thermostabilität auszeichnen.
How to Choose the Right DNA Polymerase for PCR
Choosing the correct DNA polymerase for PCR depends on many factors. NEB offers a range of DNA polymerase formulations optimized for different applications. In this video Product Marketing Manager Fiona Stewart explains which products to choose for routine amplification, high-fidelity amplification, and next generation sequencing applications depending on the base content of your target amplicon. To choose the right DNA polymerase for your application please visit our PCR selection tool
Important Tips for Working with Q5 Polymerase
Are you using Q5® High-Fidelity DNA Polymerase? Then you probably already know how robust and accurate the DNA amplification is (greater than 100X Taq DNA Polymerase). Melanie has some tips for ensuring optimal performance with Q5. If you haven’t tried Q5 for your high-fidelity amplification yet, what are you waiting for?
Why Choose Q5 High-fidelity Polymerase?
Q5® High-Fidelity DNA Polymerase sets a new standard for both fidelity and robust performance across the GC spectrum. With the highest fidelity amplification available (more than 100 times higher than Taq), Q5 DNA Polymerase results in ultra-low error rates. Q5 DNA Polymerase is composed of a novel polymerase that is fused to the processivity-enhancing Sso7d DNA binding domain, improving speed, fidelity and reliability of performance. In this video Senior Applications Scientist Nicole Nichols explains which Q5 formulation is optimal for your specific PCR application.
How to Amplify GC-rich DNA
Amplification of GC-rich DNA can be challenging with traditional DNA polymerases. NEB offers a range of DNA polymerase formulations optimized for the amplification of GC-Rich DNA. In this video Senior Applications Scientist Nicole Nichols explains which products to choose for routine amplification, high-fidelity amplification, and next generation sequencing applications depending on the base content of your target amplicon.
Mehr Video Tutorials finden Sie auf NEBs YouTube Kanal.
Wählen Sie hier die richtige Polymerase:
★ = empfohlenes Produkt
| Standard PCR | HIGHEST FIDELITY PCR |
|
| ONETaq/ ONETaq HOT START |
Q5/Q5 HOT START |
|
| EIGENSCHAFTEN | ||
| Sequenzgenauigkeit vs. Taq | 2x | ~280x(1) |
| Amplikongröße | < 6 kb | ≤ 20 kb |
| Extensionszeit | 1 kb/min | 6 kb/min |
| Resultierende Enden | 3´ A/Blunt | Blunt |
| 3´→5´ Exonuklease | Ja | Ja |
| 5´→3´ Exonuklease | Ja | Nein |
| Units/50 µl Reaktion | 1.25 | 1.0 |
| Annealing Temperatur | Tm–5 | Tm+3 |
| ANWENDUNGEN | ||
| Routine/Standard PCR | ★ | • |
| Colony PCR | ★ | |
| Erhöhte Sequenzgenauigkeit | • | ★ |
| Höchste Sequenzgenauigkeit | ★ | |
| Hohe Ausbeuten | ★ | ★ |
| Schnelligkeit | ★ | |
| Lange Amplikons | ★ | |
| GC-reiche Templates | ★ | ★ |
| AT-reiche Templates | ★ | ★ |
| High Throughput | • | • |
| Multiplex PCR | • | • |
| Site-directed Mutagenesis | ★(2) | |
| NGS ANWENDUNGEN | ||
| NGS Library Amplifikation | ★(3) | |
| VERFÜGBARE FORMATE | ||
| Hot Start | • | • |
| Kit | • | |
| Master Mix | • | • |
| Direct Gel Loading | • | |
(1) Lesen Sie, wie „Single molecule PacBio Sequencing“ genutzt wurde, um mehr über die Ursachen von PCR-Fehlern zu lernen: Potapov, V. and Ong, J.L. (2017) PLOS One, 12(1): e 0169774
(2) TIPP: Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit (#E0554)
(3) TIPP: NEBNext Ultra II Q5 Master Mix (#M0544)
NEB Tools
Nutzen Sie den Tm Calculator zur Bestimmung der optimalen Annealing-Temperatur Ihrer PCR Reaktion. Die beste Temperatur wird unter Berücksichtigung der verwendeten Polymerase, der Primer-Sequenzen und der eingesetzten Primer-Konzentration berechnet.
Mit dem NEBioCalculator lassen sich schnell und einfach verschiedene Parameter von DNA und RNA bestimmen und umrechnen. Das Tool beinhaltet unter anderem die Umrechnung von Masse in molare Masse, der optischen Dichte zur Konzentration, sowie Funktionen zur Berechnung von Verdünnungen und Molaritäten.
Nutzen Sie den NEBaseChanger für das Primer-Design bei Verwendung des Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit.
Unser PCR Selection Tool hilft bei der Auswahl der richtigen Polymerase für Ihre PCR, egal, ob es sich um besonders lange, komplexe oder GC-reiche Targets handelt.
Schätzen Sie mit dem PCR Fidelity Estimator den Prozentsatz der korrekten DNA-Kopien pro PCR-Zyklus für ausgewählte DNA-Polymerasen.
Der DNA Polymerase Selection Chart führt alle Eigenschaften auf, die bei der Auswahl der richtigen Polymerase in Betracht gezogen werden sollten.
Troubleshooting Guides
Usage Guidelines
- DNA Damage and PreCR
- General Guidelines for Successful RNA Purification Using the Monarch Total RNA Miniprep Kit
- Guidance on Choosing Sample Input Amounts when Using the Monarch Total RNA Miniprep Kit
- Guidelines for PCR Optimization with OneTaq and OneTaq Hot Start DNA Polymerases
- Guidelines for PCR Optimization with Taq DNA Polymerase
- Guidelines for PCR Optimization with Thermophilic DNA Polymerases
- Optimization Tips for Luna One-Step RT-qPCR
- Optimization Tips for Luna qPCR
Informationsmaterial
Die unten aufgeführten Broschüren können Sie gerne kostenfrei anfordern oder nutzen Sie unseren PDF-Download.
Weiterführende Informationen finden Sie unter Technische Ressourcen oder auf neb.com. Informationen zu Namensrechten finden Sie hier.
